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細(xì)胞外泌體數(shù)量的計(jì)算方法

 更新時(shí)間:2023-09-13 點(diǎn)擊量:2589

細(xì)胞外泌體(extracellular vesiclesEVs)是一類由細(xì)胞釋放的小型膜泡,內(nèi)含有多種生物活性分子,如蛋白質(zhì)、核酸和代謝物等。 EVs在細(xì)胞間傳遞信息和調(diào)節(jié)多種生物過程中起著重要作用,因此引起了廣泛的研究興趣。

在研究細(xì)胞外泌體時(shí),一個(gè)關(guān)鍵問題是如何準(zhǔn)確計(jì)算收獲的細(xì)胞外泌體數(shù)量。本文將介紹一種常用的方法,可用于推算細(xì)胞外泌體的數(shù)量。

假設(shè)我們有一份300ml的上清液樣品,目標(biāo)是推算其中細(xì)胞外泌體的數(shù)量。可以通過以下步驟進(jìn)行:

1.我們需要對(duì)上清液進(jìn)行離心處理,以沉淀出細(xì)胞外泌體。離心的速度和時(shí)間可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行優(yōu)化,一般來說,1500-2000g的離心速度,30分鐘的離心時(shí)間可以獲得較好的沉淀效果。

2.接下來,我們需要重懸細(xì)胞外泌體沉淀體,使用1mlPBS緩沖液進(jìn)行重懸。為了確保充分分散,可使用超聲波或輕輕振蕩的方式進(jìn)行混合。

3.現(xiàn)在,我們可以利用一種常用的推算方法來計(jì)算細(xì)胞外泌體的數(shù)量。這種方法是通過測(cè)量細(xì)胞外泌體的蛋白質(zhì)含量,然后根據(jù)已知的細(xì)胞外泌體蛋白質(zhì)含量來推算其數(shù)量。

4.使用蛋白質(zhì)測(cè)量方法,如BCABradford方法,測(cè)量每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)樣品的蛋白質(zhì)含量。將測(cè)量結(jié)果記錄下來。

5.將標(biāo)準(zhǔn)樣品的蛋白質(zhì)含量與已知數(shù)量的細(xì)胞外泌體進(jìn)行對(duì)比,建立標(biāo)準(zhǔn)曲線??梢允褂梅蔷€性回歸分析來擬合數(shù)據(jù),確定標(biāo)準(zhǔn)曲線的方程式。標(biāo)準(zhǔn)曲線可以用于后續(xù)樣品的泛定量。

6.用相同的蛋白質(zhì)測(cè)量方法,測(cè)量待推算樣品(重懸后的細(xì)胞外泌體懸液)的蛋白質(zhì)含量。將測(cè)量結(jié)果代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程式中,計(jì)算細(xì)胞外泌體的數(shù)量。

需要注意的是,此方法僅提供細(xì)胞外泌體數(shù)量的推算,結(jié)果可能存在一定的誤差。另外,外泌體的大小和組成可能在不同的樣品之間有所差異,因此標(biāo)準(zhǔn)曲線的準(zhǔn)確性需要在不同樣品中進(jìn)行驗(yàn)證。

例如,如果我們測(cè)得重懸液的蛋白質(zhì)含量為2μg/mL,并且根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線推算出每1μg蛋白質(zhì)對(duì)應(yīng)100萬個(gè)細(xì)胞外泌體。那么我們可以推算出300ml的上清液中細(xì)胞外泌體的數(shù)量為6×10^8個(gè)(2μg/mL × 300ml × 100萬個(gè)/μg)。

綜上所述,推算細(xì)胞外泌體的數(shù)量是基于測(cè)量重懸液中的蛋白質(zhì)含量,并通過標(biāo)準(zhǔn)曲線推算出細(xì)胞外泌體的實(shí)際數(shù)量。這種方法簡(jiǎn)單且經(jīng)濟(jì)實(shí)用,適用于常規(guī)實(shí)驗(yàn)室中對(duì)細(xì)胞外泌體數(shù)量的推算。然而,需要注意的是,這種方法僅能提供近似數(shù)量,精確的細(xì)胞外泌體數(shù)量仍需通過更精細(xì)的測(cè)量方法來得出。

細(xì)胞外泌體

當(dāng)收集細(xì)胞外泌體體諒過少的時(shí)候可以通過以下幾個(gè)方法解決:

1. 增加細(xì)胞密度:可以嘗試在大皿中接種更多的細(xì)胞,以增加外泌體的產(chǎn)量。但是需要注意,太高的細(xì)胞密度可能會(huì)引起細(xì)胞過度增殖或細(xì)胞死亡,因此需要找到一個(gè)合適的平衡點(diǎn)。

2. 使用外泌體增多的培養(yǎng)條件:調(diào)整細(xì)胞培養(yǎng)的條件,例如改變培養(yǎng)基的成分、優(yōu)化培養(yǎng)的pH值、溫度或氧氣濃度等,以促進(jìn)外泌體的釋放。

3. 使用細(xì)胞因子或化學(xué)物質(zhì)刺激:有些細(xì)胞因子或化學(xué)物質(zhì)可以刺激細(xì)胞釋放更多的外泌體。你可以嘗試添加適量的這些物質(zhì)到培養(yǎng)基中,以提高外泌體的產(chǎn)量。

4. 使用細(xì)胞工程技術(shù):一些細(xì)胞工程技術(shù)可以改變細(xì)胞的代謝途徑或基因表達(dá),從而增加外泌體的產(chǎn)量。例如,通過過表達(dá)某些關(guān)鍵基因可以增加細(xì)胞產(chǎn)生外泌體的能力。這種方法可能需要更復(fù)雜的實(shí)驗(yàn)步驟和方案,但可以獲得更高的外泌體產(chǎn)量。

   蘇州阿爾法生物提供的生物反應(yīng)器、PCR儀、振蕩培養(yǎng)箱、離心機(jī)、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀、細(xì)胞分析儀、電泳儀、粒徑分析儀、流式細(xì)胞儀等廣泛用于細(xì)胞外囊泡的分離和表征研究等。