在過去的幾十年中，科學(xué)家們對基因編輯和基因修復(fù)技術(shù)進(jìn)行了大量的研究與實驗。這些技術(shù)的發(fā)展為人類帶來了巨大的進(jìn)步，使得我們能夠更好地理解基因組的功能和調(diào)控，以及開發(fā)新的醫(yī)學(xué)研究方法。而其中一項成為重要和引人關(guān)注的技術(shù)就是CRISPR-Cas9。
CRISPR-Cas9是一種革命性的基因編輯工具，能夠通過精準(zhǔn)地剪切DNA序列來實現(xiàn)基因編輯和修復(fù)。CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) 是一種存在于細(xì)菌和古菌中的天然防御機制，用于識別和摧毀入侵者的DNA。Cas9 (CRISPR associated protein 9) 是CRISPR 系統(tǒng)中的核酸酶，負(fù)責(zé)剪切DNA。結(jié)合CRISPR和Cas9，科學(xué)家們成功地將這一機制應(yīng)用于基因編輯和修復(fù)領(lǐng)域。
CRISPR-Cas9技術(shù)的工作原理非常簡單?？茖W(xué)家們開始設(shè)計并合成一小段RNA引導(dǎo)序列，該序列能夠與目標(biāo)基因的特定序列配對。然后，將這段 RNA引導(dǎo)序列與Cas9蛋白結(jié)合，形成可以識別和剪切DNA的復(fù)合物。一旦復(fù)合物與目標(biāo) DNA配對，Cas9蛋白就會剪切目標(biāo)基因的DNA鏈，從而引發(fā)一系列的修復(fù)過程。
CRISPR-Cas9技術(shù)的應(yīng)用范圍比較廣泛。它可以用于研究基因功能和調(diào)控機制。通過定點編輯 DNA 序列，科學(xué)家們可以觀察和分析基因在細(xì)胞或生物體中的功能變化。這種精確操縱基因的能力，使得科學(xué)家們能夠更好地理解生物體的發(fā)育、疾患發(fā)生機制以及藥物開發(fā)。
除了研究應(yīng)用外，CRISPR-Cas9還具有潛力在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域進(jìn)行基因改良?？茖W(xué)家們利用CRISPR-Cas9技術(shù)，可以快速、精確地在作物基因組中引入有益特質(zhì)，如提高產(chǎn)量、抗蟲和抗逆性。這種基因編輯的方法，相較于傳統(tǒng)基因改良，具有更高的效率和更短的時間。
實驗案例：
在一項實驗中，科學(xué)家們使用CRISPR-Cas9技術(shù)成功地修復(fù)了人類β-地中海貧血病變體。他們通過剪切和修復(fù)患者的異?；颍诩?xì)胞中實現(xiàn)了基因修復(fù)。此次實驗的成功證明了 CRISPR-Cas9技術(shù)在基因醫(yī)學(xué)研究中的潛力，開創(chuàng)了醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域新高
然而，盡管CRISPR-Cas9技術(shù)具有巨大的潛力和許多應(yīng)用前景，但它也面臨一些挑戰(zhàn)。但是挑戰(zhàn)之一是確保編輯的準(zhǔn)確性和安全性，以避免不可預(yù)見的副作用和后果。此外，倫理和法律問題也需要認(rèn)真考慮和解決，以確保技術(shù)的適當(dāng)應(yīng)用。
Cas9基因編輯- 基因定點敲入技術(shù)服務(wù)
超過百個成功敲入KI案例，蘇州阿爾法生物攜手海星生物一站式解決細(xì)胞基因功能研究純合/雜合敲入細(xì)胞系。
Cas9-Cell line Knock-In service（Cas9-CKI）基因定點敲入細(xì)胞系是Cas9X技術(shù)團(tuán)隊針對實驗室常用的各種細(xì)胞系，研究并確立針對不同的細(xì)胞的外源基因或者片段高效敲入（Knock-in, KI）的技術(shù)操作規(guī)程，主要目的就是：解決KI效率低下和KI片段長度限制的問題。
我們還能為您提供：
基因敲除細(xì)胞系服務(wù)
基因點突變細(xì)胞系服務(wù)
基因定點敲入細(xì)胞系服務(wù)
微生物基因編輯服務(wù)
基因敲除Cell Pool服務(wù)
案例分析
基因敲入項目名稱
構(gòu)建eGFP基因敲入的人膠質(zhì)瘤細(xì)胞細(xì)胞
實驗設(shè)計
種屬：Human； 基因名稱：PRNP
gRNA位點：ATCTTCCTGATAGTGGGATGAGG
Donor載體：5'arm-eGFP-3'arm
基因敲入技術(shù)原理圖
細(xì)胞信息
種屬：Human； 細(xì)胞名稱：人膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251
培養(yǎng)基：DMEM，10%FBS
細(xì)胞檢測
無菌檢測：合格； 支原體檢測：合格
細(xì)胞克隆形成率檢測：細(xì)胞增殖能力較好，克隆形成率較好。
細(xì)胞基因型檢測：針對gRNA打靶位置及其附近基因組序列進(jìn)行測序。測序結(jié)果與理論序列一致。
細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)
電轉(zhuǎn)參數(shù)：1005V，35ms，2次； 電轉(zhuǎn)體系：10 uL
PCR 篩選
篩選克隆數(shù)量：160； 陽性數(shù)量：10
